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方法快訊 | 分析血漿中的雌二醇、非結合型雌酮、總雌酮

文章出處:原創 人氣:2412 發表時間:2024-06-28
  戊酸雌二醇片為雌激素類藥,用于補充自然或人工絕經相關的雌激素缺乏:治療血管舒縮性疾病,生殖泌尿道營養性疾病以及精神性疾病等。戊酸雌二醇片FDA的BE指南亦建議檢測“雌酮(總)”進行等效性評價,并提交雌二醇(未結合)和雌酮(未結合)數據作為可比治療結果的支持性證據。

FDA關于戊酸雌二醇片的BE指南

  而對于生物等效性評價,準確定量血藥濃度是至關重要的。
  分析方法的難點
  難點1內源性化合物定量分析
  雌二醇為內源性物質,無法使用常規空白基質配制標準曲線進行準確定量分析,一般采用替代基質法。做方法驗證時需有替代基質和真實基質的質控樣品,同時需要做平行性實驗,平行性實驗通過才證明替代基質的可行性。

表1人血漿中雌激素濃度參考范圍

  難點2酶解條件
  與葡萄糖醛酸和硫酸結合是人體內類固醇代謝的一個主要途徑。因此生物基質中的類固醇都以結合態和非結合態兩種形式存在。由于缺乏類固醇結合物的標準對照品,通常采用酶解的方式間接的對類固醇結合物進行定量分析。不同來源的酶(大腸桿菌、哺乳動物牛肝臟等)具有不同的活性需要優化溫育條件,確保測樣時酶解完全。
  難點3定量下限低
  為了準確定量未知基質樣品中化合物的濃度,定量下限需做到pg級(雌二醇與雌酮的定量下限分別為2.000與10.00pg/mL),已報道的檢測方法取樣量較大,約0.3~0.5 mL血漿量,且需要進行衍生化操作復雜,而復雜的前處理步驟會增加前處理出錯機率與實驗失敗的風險。實驗室通過方法優化,采用簡單的一步萃取法提取基質中的雌二醇與雌酮,不僅操作簡單,無基質效應,且通量高,同時降低了血漿用量。
  晶易生物分析實驗室檢測方法優勢
  分析方法已成功用于多個項目,ISR合格率≥98%。
  一個分析方法檢測未結合的雌二醇與雌酮可快速分析大量臨床研究樣本,且靈敏度高,適用于臨床的BE/PK研究。
  使用替代基質分析,充分考察替代基質的選擇性、穩定性、基質效應和回收率等方面,確保替代基質的適用性。
  測樣過程中加入酶解質控,確保每批次樣本酶解完全。
  分析方法簡述

圖1雌二醇STD1(2.000pg/mL)色譜圖、標準曲線圖

圖2雌酮STD1(10.00pg/mL)色譜圖、標準曲線圖

  同類型項目經驗
  酶解/水解項目
  二十碳五烯酸乙酯、依折麥布阿托伐他汀、柑橘黃酮、賽洛多辛、依折麥布......
  內源性項目
  蔗糖鐵、維生素K1、柑橘黃酮、丁二磺酸腺苷蛋氨酸、熊去氧膽酸、黃體酮、氨茶堿......
  Pg級定量項目
  氟替卡松,莫米松、東莨菪堿、異丙托溴銨,奧昔布寧、骨化三醇、雌三醇......
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